Çalışmanın Amacı:
Kültür ortamında yetiştirilen hücreler; Biyofarmasötik endüstrisinde, Monoklonal antikorlar (MAb’lar) ve aşılar gibi aktif farmasötik bileşenlerin geliştirilmesi sırasında, temel araştırmalarda ve sonrasında da üretim aşamasında kullanılırlar.
Rejeneratif tıp alanlarında hücresel araştırmalardaki ve ilaç pazarındaki MAb temelli ilaçların alanındaki artış, kök hücrelere ve MAb üreten hücrelere hasar vermeden kültür ortamlarının izlenilmesi ihtiyacını olarak ortaya çıkarmıştır.
Bu ihtiyaca cevap vermenin en hızlı ve kolay yolu da kültür ortamı bileşenlerinin ve hücreler tarafından salgılanan metabolitlerin eş zamanlı çok-bileşenli analizinin LC-MSMS ile bu analizlerin gerçekleştirilmesidir.
Bu çalışmada, Shimadzu (Kyoto, Japonya) tarafından geliştirilen “Cell Culture Profiling Method Package” kullanılarak 95 bileşenin (Tablo-1) eş zamanlı analizi, numune başına analiz süresi 17 dakika olacak şekilde gerçekleştirilmiştir.
Tam kantitatif analiz amaçlı olarak Glukoz ve Laktik asit için standart kalibrasyon eğrileri çizilmiş, diğer bileşenler içinse, 2-İzopropilmalik asit iç standardı (ISTD) kullanılarak yarı-kantitatif profil analizi gerçekleştirilmiştir.
Tablo 1: Cell Culture Profiling Method Package ile 17 dakikalık analiz süresinde eş-zamanlı olarak izlenebilen parametreler
Metot ve Materyaller:
Hücre Kültürü Koşulları;
Standard hazırlık:
Semi-Kantitatif Analiz;
0,5 mmol/L 2-İzopropilmalik asit çözeltisi (Su:Asetonitril (50:50, v/v) içerisinde) hazırlanır.
Numune Hazırlık:
*Burada, aplikasyon notunda sonuçları verilen parametrelerin, MRM geçişleri özetlenmiştir, diğer parametrelerin MRM geçişleri için Ant Teknik Cihazlar Ltd. ile iletişime geçebilirsiniz.
Analitik Koşullar:
MS Koşulları;
Sonuçlar ve Değerlendirme:
Bu çalışmada, Glukoz ve Laktik asit derişimleri kantitatif olarak belirlenirken, diğer 93 parametre için profil analizi (yarı-kantitatif analiz) yapılmış olup kullanılan iç standardın (2-izopropilmalik asit) elde edilen alanına karşı hedef analitin pik alanındaki artış/düşüş grafiğe dökülerek incelenmiştir.
Kromatogramlar
Kantitatif Analiz Sonuçları ve Kalibrasyon Eğrileri
Yarı-Kantitatif Analiz sonuçları (Profil Analizi)
Bilgilendirme ve Teşekkür
Çalışmada kullanılan Hücre Kültürü numuneleri, Marmara Üniversitesi Biyoproses Mühendisliği ve OMICs Araştırma Grubu (Bioprocess Engineering and OMICs Research Group) tarafından sağlanmıştır. Desteklerinden ötürü kendilerine teşekkür ederiz.
Dr. Engin Bayram
Kimyager/MS Grubu Müdür Yardımcısı
İş Geliştirme & Aplikasyon
Ant Teknik Cihazlar
